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样品根据本试剂盒提供的方法分离病毒颗粒，在特定的Digestion Buffer和Proteinase K的作用下裂解释放出基因组DNA，采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质，最后用Elution Buffer、TE或者水洗脱。得到高质量的基因组DNA。本试剂盒所得到的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等后续的分子生物学试验。

• 无需酚和氯仿抽提，无需乙醇沉淀。
  
• 通常可以除去生物样品的PCR反应抑制物。
  
• 操作简单快速，抽提过程60分钟左右完成。
  
• 提取的基因组DNA纯度好，得率高。

• 自备试剂：无水乙醇、异丙醇、PBS或生理盐水等。
  
• 使用前请检查Digestion Buffer，如有沉淀，请于55℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。
  
• 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
  
• PW Solution使用前加入12mL（50T）或24mL（100T）的异丙醇。
  
• 提前将水浴锅调至55℃备用。

• 体液样品的准备：如果制备病毒DNA的目的只是为PCR准备模板，除尿液外的大多数体液样品，如血清，血浆，脑脊髓分泌液，唾液等，可以直接使用200μL体液样品即可。
  
• 粪便样品的准备：取1mL粪便，加入5mL生理盐水，混匀，4000rpm离心20min。用0.22μm一次性过滤器过滤，收集滤液。滤液分装成每管200μL，-20℃保存，备用。
  
• 眼、鼻、喉等拭样的准备：将拭样转移至干净的离心管中，加入2mL PBS或生理盐水，室温浸泡2-5h。取上清，用Amicon Centrion-100（一种超滤膜）将上清浓缩到200μL。
  
• 尿液样品的准备：用Amicon Centrion-100将尿液浓缩到200μL。

• 向上述样品中依次加入400μL Digestion Buffer和20μL Proteinase K，震荡混匀1min，55℃温浴30min。间或混匀，直至充分裂解。
  
  • 通常裂解时间为30～60分钟。
    
  • 如果需要得到无RNA污染的DNA样品，可以在水浴后加入20μL RNase A (20mg/mL)，混匀，在室温放置5分钟。
    
  • 对于组织样品，温育时间可延长至1～3小时，直至组织完全裂解。
• 加入200μL BD Buffer，充分混匀。
  
  • 加入BD Buffer后，可能产生白色沉淀，70℃水浴10分钟沉淀会消失，如果溶液仍没有澄清，说明裂解不彻底，会降低基因组DNA的得率和纯度。
• 加入400μL无水乙醇，充分颠倒混匀。
  
  • 溶液和乙醇须充分混匀，否则会影响DNA得率。
    
  • 加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取和应用。
• 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮物全部加至吸附柱中，静置2min，12000rpm离心3
  min，倒掉收集管中废液。
  
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL PW Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • PW Solution使用前请检查是否按比例加入异丙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，加入500μL Wash Solution，10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
  
  • Wash Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
• 将吸附柱放回收集管中，10000rpm离心2min。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
• 将吸附柱放入干净的1.5mL离心管中，在吸附膜中央加入30μL预热（60℃）的Elution Buffer，静置5min，10000rpm离心1min，将所得到的DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
  
  • Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH> 7.0）代替。
    
  • 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
    
  • 请勿使用小于40μL的洗脱液进行洗脱。
    
  • 体液中病毒DNA因含量太少，通常不能用琼脂糖凝胶直接观察。
    
  • 一般50μL PCR反应体系中取5-10 μlDNA作模板。